Não
há necessidade de preparação da amostra.
O material coletado com o kit UCM® é estável
à temperatura ambiente por até 15 dias,
e se mantido na geladeira (entre 2 a 8ºC) sua viabilidade
se eleva para até seis meses.
Fase
de Desnaturação 1.
Pipetar 500µl de Reagente de Desnaturação
no tubo com amostra e homogeneizar no vortex. As amostras
devem se tornar púrpuras.
Trocar a tampa de pressão pela tampa com rosca.
2.
Incubar a 65ºC por 45 minutos.
3.
Preparar a sonda.
Fase
de Hibridização 4.
Pipetar 25µl de sonda e 75µl de amostra no
microtubo, cobrir com Plate Sealers e homogeneizar no
Rotary-Shaker a 1.100 rpm por 2 minutos. A coloração
deverá se tornar amarela.
5.
Incubar a 65ºC por 60 minutos
Fase
de Captura dos Híbridos 6.
Transferir todo o material para a microplaca.
7.
Levar ao Rotary-Shaker a 1.100 rpm por 60 minutos a 20-25ºC.
8.
Preparar a solução de lavagem.
Fase
de Reação com o Conjugado 9.
Desprezar todo o conteúdo da microplaca.
10.
Adicionar 75µl de Reagente de Detecção
1 em cada micropoço.
11.
Incubar a 20-25ºC por 30 minutos.
12.
Lavar a microplaca 6 vezes.
Fase
de Amplificação de Sinais 13.
Adicionar 75µl de Reagente de Detecção
2 em cada micropoço.
14.
Incubar a 20-25ºC por 15 minutos.
Fase
de Leitura por Quimioluminescência 15.
Introduzir a microplaca no DML-2000 e fazer a leitura.
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