Em espécimes colhidos no coletor da Digene
não há necessidade de preparação
de amostra. O material coletado com o kit UCM®
é estável à temperatura ambiente
por até 15 dias, e se mantido na geladeira
(entre 2 a 8ºC) sua viabilidade se eleva para
até seis meses.
Fase
de Desnaturação
1. Pipetar 500µl de Reagente de Desnaturação
no tubo com amostra e homogeneizar no vortex. As amostras
devem se tornar púrpuras.
Trocar a tampa de pressão pela tampa com rosca.
2. Incubar a 65ºC por 45 minutos.
3. Preparar a sonda.
Fase
de Hibridização
4. Pipetar 25µl de sonda e 75µl de amostra
no microtubo, cobrir com Plate Sealers e homogeneizar
no Rotary-Shaker a 1.100 rpm por 2 minutos. A coloração
deverá se tornar amarela.
5. Incubar a 65ºC por 60 minutos
Fase
de Captura dos Híbridos
6. Transferir todo o material para a microplaca.
7. Levar ao Rotary-Shaker a 1.100 rpm por 60 minutos a
20-25ºC.
8. Preparar a solução de lavagem.
Fase
de Reação com o Conjugado
9. Desprezar todo o conteúdo da microplaca.
10. Adicionar 75µl de Reagente de Detecção
1 em cada micropoço.
11. Incubar a 20-25ºC por 30 minutos.
12. Lavar a microplaca 6 vezes.
Fase
de Amplificação de Sinais
13. Adicionar 75µl de Reagente de Detecção
2 em cada micropoço.
14. Incubar a 20-25ºC por 15 minutos.
Fase
de Leitura por Quimioluminescência
15. Introduzir a microplaca no DML-2000 e fazer a leitura.
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